中文名稱    BD 流式校準微球 儀器質控微球655050    

貨號           655050    

品牌           BD Biosciences    

規(guī)格          50 Tests/瓶，3 mL/瓶    

微球組成    等量3μm亮珠 + 3μm中等亮度珠 + 2μm暗珠    

基質           聚苯乙烯微球    

懸浮液       含BSA和0.1%疊氮·化鈉的PBS    

熒光染料    FITC、PE、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、APC-H7、Alexa Fluor 700、BD Horizon V450/V500/V500-C、Pacific Blue、AmCyan等    

激發(fā)激光    藍色（488nm）、紅色（640nm）、紫色（405nm）、紫外（355/375nm）、綠色（532nm）、黃綠色（561nm）    

發(fā)射范圍    390-800nm    

適用軟件    BD FACSDiva™ v7.0及以上    

支持機型    BD FACSCanto™ II（研究用途）、BD FACSAria™系列、BD® LSR數(shù)字流式平臺    

校準模式    Quick QC（3-5分鐘）、Full CS&T（15-20分鐘，含補償矩陣）    

儲存條件    2-8℃，避光保存    

禁忌          不可冷凍    

有效期    至瓶簽標注日期    

稀釋后穩(wěn)定性    2-8℃避光24小時；15-25℃避光8小時    

監(jiān)管狀態(tài)    RUO（Research Use Only）    

包裝    單瓶裝（655050）；三瓶裝套裝（655051，150 Tests）    

供應商    上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司    

技術原理

1. 三色微球梯度：模擬真實細胞群體的散射與熒光分布

655050包含三種亮度級別的微球（亮/中等/暗），其設計邏輯模擬真實樣本中陽性群、弱陽性群和陰性群的分布：

3μm亮珠：高熒光強度，用于校準檢測器線性范圍上限及PMT電壓優(yōu)化

3μm中等亮度珠：中等信號，驗證檢測器在常用工作區(qū)間的線性響應

2μm暗珠：低熒光/小顆粒，評估儀器電子噪聲背景及靈敏度閾值

通過同時采集三種微球的FSC、SSC及多色熒光信號，BD FACSDiva™軟件自動計算各通道的Median熒光強度、%rCV（穩(wěn)健變異系數(shù)）及靈敏度參數(shù)（SE），生成Levey-Jennings趨勢圖，實現(xiàn)儀器性能的縱向追蹤。

2. 自動批次文件導入：消除批間差異，確?？缗螖?shù)據可比

每瓶655050附有獨立批次號（與試劑盒批次號不同），使用前需從BD下載對應批次的微球批次文件（Bead Lot File）。該文件包含：

該批次微球的預期目標熒光強度值

各激光/濾光片組合的光譜重疊因子

用于自動優(yōu)化補償矩陣的參考數(shù)據

導入后，軟件自動將實測值與批次預期值比對，無需手動調整PMT電壓或補償。這一機制消除了不同批次微球間的熒光強度差異，確保實驗室數(shù)月甚至數(shù)年間數(shù)據的縱向可比性。

標準操作流程

第一步：新批次文件導入

進入"Resources & Tools"→"Bead Lot Files"

輸入瓶簽上的微球批次號（非試劑盒批次號），下載對應批次文件

在BD FACSDiva™軟件中：Cytometer→CS&T→Import Bead Lot File，導入下載文件

第二步：微球準備

從2-8℃冰箱取出，室溫平衡15分鐘

渦旋振蕩≥30秒（轉速≥2000rpm），肉眼確認無沉淀

取50-100μL混勻微球加入12×75mm聚苯乙烯上樣管

第三步：上機校準

軟件選擇：Cytometer→CS&T→選擇Quick QC或Full CS&T

上樣管置于SIP，流速設為Low（12μL/min）

目標收集≥10,000個微球事件

軟件自動執(zhí)行校準并生成PDF報告

第四步：結果判讀

FSC-H：6μm微球群CV≤3%

各熒光通道Median值在預設目標范圍內

激光功率波動＜±2%

未通過項標紅，需排查或聯(lián)系工程師

用戶常見問題解答

Q：655050與655051有何區(qū)別？如何計算采購量？

A： 655050為單瓶裝（50 Tests），655051為三瓶裝套裝（150 Tests，3×50 Tests）。以每日1次Quick QC、每周1次Full CS&T計算，單瓶50 Tests約可用6-7周（假設每周5個工作日）。建議中型實驗室按2-3瓶/季度批量采購，降低單次物流成本并確保批次一致性。大型核心平臺或CDMO企業(yè)建議直接采購655051套裝，單價更優(yōu)。

Q：655050與641319/642412（Diva 6.X版CS&T Beads）能否混用？

A： 不能混用。641319/642412為BD FACSDiva™軟件v6.2及更早版本設計的Cytometer Setup & Tracking Beads，其熒光染料配方、批次文件格式及軟件接口與v7.0+版本不兼容。655050專為Diva v7.0及以上版本優(yōu)化，支持超過100種激光和濾光片組合。使用前務必核對軟件版本：v7.0+選655050/655051；v6.2及更早選641319/642412?；煊脤е滦适』驍?shù)據失真。

Q：微球稀釋后超過穩(wěn)定時間還能用嗎？

A： 不能。BD明確：稀釋后微球在2-8℃避光條件下穩(wěn)定24小時，15-25℃避光條件下穩(wěn)定8小時。超過穩(wěn)定時間后，熒光染料可能發(fā)生光漂白或降解，導致Median值漂移、%rCV升高，校準結果不可靠。建議根據當日測試量精確配制，未用完的稀釋微球按時丟棄。原瓶未稀釋微球在2-8℃避光條件下可穩(wěn)定保存至瓶簽標注的有效期。

Q：655050能否用于補償矩陣的設定？

A： 可以，但需區(qū)分場景。655050的Full CS&T模式包含補償矩陣的自動優(yōu)化，適用于日常質控中的補償驗證。但對于新抗體 panel 的初始補償設定，仍需使用單染樣本或專用補償微球（如BD CompBeads）進行精確補償。655050的補償功能更側重于"驗證現(xiàn)有補償是否漂移"，而非"建立新補償"。多色實驗（≥8色）建議每月用655050 Full CS&T驗證補償，發(fā)現(xiàn)漂移及時用CompBeads重新調整。

Q：華雅思創(chuàng)供應的BD流式質控產品線還包括哪些？

A： 華雅思創(chuàng)作為BD授權代理，提供流式細胞術全鏈條質控方案：

儀器校準：655050/655051 CS&T Research Beads（Diva 7+）、641319/642412 CS&T Beads（Diva 6.X）

補償設定：BD CompBeads（抗小鼠/抗大鼠/抗人）、BD FC Beads 5-Color Kit

絕對計數(shù)：BD Trucount Tubes（含已知數(shù)量微球）

分選質控：BD FACS Accudrop Beads（345249）

日常清洗：340345 FACSClean、660585 Detergent Solution、342003 FACSFlow鞘液

驗證微球：653144 8-Peak Beads（Accuri）、653145 6-Peak Beads

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